DNAren sintesia kimikoa fase solidoko sintesi estrategian eta fosforamiditaren kimikan oinarritzen da.DNAren sintesia biologikoaren aldean, DNAren sintesia kimikoko materiala DMT (4, 4-dimethoxytrityl) eta fosforamidita eraldatutako desoxirriboxyside da, 1. Irudian ikusten den bezala. DNAren sintesia euskarri solidoan egiten da (hainbat eskain ditzakegu).Oligo Sintesi Zutabea), hau da, CPG (poro kontrolatutako beira) eta PS (poliestirenoa), eta sintesi osoa batean egiten da.DNA/RNA sintetizadorea, gure ekipamendu nagusia dena, eredu desberdinak ditu, hala nola: HY kanal bakarreko sintetizadorea, HY-12, HY-192 eta abar, sintesiaren norabidea 3'-tik 5'-ra da, eta nukleotido bat euskarri solidoan sartzen da baten bidez. sintesi zikloa.Normalean sintesi-ziklo batek lau urrats ditu: Desprotekzioa, Akoplazioa, Kapturatzea eta Oxidazioa (2. Irudia).Desprotekzioa euskarri solidoan DMT taldea edo aurreko nukleosidoan dagoen 5' hidroxilo taldea kentzeko ezartzen da, diklorometanoko % 3ko azido trikloroacetikoa desprotekzio erreaktibo gisa erabiltzen da.Ondoren, fosforamidita eraldatutako desoxirriboxisideari hidroxilo taldeari esposizioa utzi zitzaion aktibatzaile baten laguntzaz, hau da, 5-etiltiotetrazole edo 4,5-dizianoimidazolaren laguntzarekin, fosfitetriesterra (III) osatuz, eta Akoplamendu urratsa gauzatu zen.Akoplazio urratsean erreakzionatu gabeko hidroxilo taldea blokeatzeko Cappping urratsa egiten da, nahi ez diren akats-sekuentziak sortzea minimizatzeko.Azkenik, fosfitetriester ezegonkorra (III) fosfortriester kimiko egonkorra (V) oxidatzen da iodoa oxidatzaile gisa piridinaren presentzian.
Sintetizatutako DNA euskarri solidotik aminolisiaren bidez zatitu liteke, fosfortriesterrean 2-zianoetil babestutako taldea eta nukleobaseko amida aldi berean mozten dira, sintesi-plakak eta sintesi-zutabeak racketan zuzenean jartzen dira erreakzio-ganberan. renDesprotekzio-ekipoak.DNA gordina HPLC, elektroforesi eta OPC bidez prestatu daiteke eskaeraren arabera, guk ere eman diezazukeguArazketa-ekipoakPostprozesatzeko.
1. Irudia dAren egitura kimikoaBzfosforamidita.
2. Irudia. DNA kimikoaren sintesiaren mekanismoa.
Argitalpenaren ordua: 2022-09-09