Azido Nukleikoen Sintesiaren Printzipioak

Azido nukleikoen sintesia fase solidoko amida sialikoaren triglizerido metodoa erabiliz egiten da, zeinaren bidez DNAren 3′ muturra fase solidoko substratu batean inmobilizatu eta nukleotidoak 3′ eta 5′ arteko norabidean gehitzen dira nahi den DNA zatia sintetizatu arte. .Hau DNAren sintesitik bereizten da DNA polimerasa aplikatzeagatik.

Lehen oinarriaren 3' muturra CPGan inmobilizatuta dago sintesian, hurrengo basearen 5'-OH di-p-tolil tritil DMTrekin babesten da, oinarriko amino taldea azido benzoikoz babestuta dago eta 3'-a. -OH gero aminofosfato konposatu batekin aktibatzen da.1 basearen 5 5′-OH eta hurrengo basearen 3′-OH oinarri 1 fosfito triglizerido bat osatzen dute, eta gero iodoz oxidatzen dena fosfato triglizerido batean, 5′-OH bigarren oinarriko babeslea kentzen da. DM azido dikloroacetikoa gehitzea hurrengo basearen gehikuntzaren bidez, eta sintesiaren ondoren 5′-OH-ren babeslea azido ahul batekin kentzen da. Zatika erretxina solidotik deskonektatzen da amonio hidroxido kontzentratuarekin, babeslea oinarritik kentzen da. amonio hidroxidoa kontzentratuta berotzean, amonio hidroxidoa kentzen da, zatia hutsean lehortzen da eta azido nukleikoa kromatografia likido bidez edo PAGE bidez araztu.

Oligo Sintesiaren urratsak

Desblokeatzea

The5 amaierako DMT babes taldea kentzen da TCA irtenbidea gehituz.

Aktibazioa

Aktibatzailea oligonukleotido monomeroarekin nahastuz bitarteko oligonukleotido aktiboa osatzeko.

Akoplamendua

5-terminal hidroxilo taldeak bitarteko oligonukleotido aktiboarekin erreakzionatzen du sorkuntzaren aurkako kondentsazio erreakzio batean, fosfito triglizerido lotura ezegonkorra sortzeko.

Kapitulua 

Kaptura-agente bat gehitzeak kondentsazio-erreakzioan parte hartzen ez duten gehiegizko hidroxilo taldeekin azetilazio-erreakzio bat egiten du.

Oxidazioa 

Ura duen iodo-disoluzioa gehitzeak fosfito-lotura ezegonkorrekin erreakzionatzen du oxidazioaren bidez, azido fosforikoko triglizerido-lotura egonkorrak sortzeko.

Zianoetilaren zatiketa

Azido nukleikoaren produktua sintesiaren ondoren, DEA disoluzioa gehituta, zianoetil taldea kentzeko fosfato triglizeridoen loturatik.

Garbitu&Desprotekzioa

Azido nukleiko-zatiak fase solidoko garraiatzailetik zatitzen dira amonio hidroxido-disoluzio kontzentratua gehituz eta gero berotzen dira babes-taldeak baseen hidrogeno-loturetatik kentzeko.